info@royanatmp.com
Cell Health Assays

Ki67

آنتی ژن هسته‌ای ki67 در تمام فازهای فعال چرخه سلولی بیان می شود (G1، S، G2 و M) اما در سلول های در حال استراحت (G0) بیانی ندارد. دیگر شاخص‌های سطحی و درون سلولی با رنگ آمیزی ki67 ترکیب می‌شوند تا زیرمجموعه سلولی مورد نظر به همراه دیگر عملکردهای مرتبط آن شناسایی شوند.

CFSE

CFSE (کربوکسی فلورسئین سوکسینیمیدیل استر) رنگی نفوذ پذیر است، که توسط استرازهای درون سلولی به رنگ سبز فلورسنت شکسته می‌شود و برای سنجش و ارزیابی  تکثیر سلول در پاسخ به  تحریکات مختلف مورد استفاده قرار می گیرد. دیگر شاخص‌های سطحی  و درون سلولی  با رنگ‌آمیزی CFSE ترکیب می‌شوند تا  پاسخ دهی زیرمجموعه های سلولی خاص مورد ارزیابی قرار گیرد.

سنجش live/dead

سنجش همزمان سلول‌های زنده و مرده با استفاده از کلسئین AM و پروپیدیوم ایوداید (PI)  که به ترتیب سلول های زنده و مرده را رنگ آمیزی می کند.

تست پیری (senescence)

فعالیت آنزیم بتاگالاکتوزیداز از طریق سنجش با تست الایزا در سلول‌های  پیری که تکثیر نمی شوند، قابل مشاهده است.

سنجش آپوپتوز در مراحل پایانی

  • TUNEL assay
  • H2A.X assay

سنجش آپوپتوز در مراحل میانی

  • Caspase 3

سنجش آپوپتوز در مراحل اولیه

  • Annexin V

ابتدا سلولها از طریق رنگ‌آمیزی با  Hoechst 33342 بررسی می‌شوند و سپس نتیجه آن‌ها توسط PCR تأیید می‌شود.

بررسی مداوم سلول‌ها از جهت آلودگی به مایکوپلاسما، سلامت آن‌ها را تضمین می‌کند، زیرا خلاصی از این نوع آلودگی بسیار دشوار است. در اینجا ما DNA را با استفاده از کیتهای تجاری موجود در بازار از سلول‌ها استخراج کرده و با استفاده از multiplex PCR  وجود 7 گونه از رایج ترین مایکوپلاسماها در سلول‌ها را بررسی می‌کنیم.

Tests for Pluripotency

ارزیابی پرتوانی با تست سنجش آلکالاین فسفاتاز (ALP assay)

آنتی ژن هسته‌ای ki67 در تمام فازهای فعال چرخه سلولی بیان می‌شود (G1، S، G2 و M) اما در سلول های در حال استراحت (G0) بیانی ندارد. دیگر شاخص‌های سطحی و درون سلولی با رنگ آمیزی ki67 ترکیب می‌شوند تا زیرمجموعه سلولی مورد نظر به همراه دیگر عملکردهای مرتبط آن شناسایی شوند.

ارزیابی پرتوانی

یکی از راه‌های اطمینان از پرتوان بودن سلول‌های بنیادی جنینی و سلول‌های بنیادی پرتوان القایی، بررسی مارکرهای تاییدکننده پرتوانی سلول است. از این مارکرها می‌توان به OCT4، Nanog ، Sox2، SSEA3،SSEA4  اشاره کرد که از طریق تکنیک‌های RT-PCR و ایمونوسیتوشیمی می‌توان به بیان آن‌ها پی برد. بانک سلول‌های بنیادی رویان با انجام این دو تکنیک به متقاضیان در جهت تایید پرتوانی سلول‌هایشان یاری می‌رساند.

 

رنگ‌امیزی ایمونوفلورسنس سلول های بنیادی جنینی انسانی

بررسی ژتهای پرتوانی در سطح mRNA با استفاده از تکنیک RT-PCR

سلول های بنیادی پرتوان قادر به تمایز به هر 3 لایه زایای جنینی هستند. هر رده جدید از این سلول ها باید پیش از ادامه آزمایش ها، از نظر پرتوانی ارزیابی شود. از جمله ابزارهای این کار می توان به تکنیک های RT-PCR و رنگ آمیزی ایمونوفلورسنس اشاره کرد که هر 2 در بانک سلول انجام می پذیرند. علاوه بر این 2 روش، بهترین راهکار برای مطالعه پرتوانی، بررسی توانایی سلول های پرتوان در تشکیل 3 لایه زایای جنینی است که از طریق تزریق سلول ها به موش فاقد سیستم ایمنی و ارزیابی تومور حاصل از آن (تراتوما) است. پس از تشکیل تراتوما با استفاده از یک جراحی ساده آن را جدا کرده و فیکس می کنند. سپس آن را در پارافین فرو برده و با استفاده از رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) وجود 3 لایه زایا را در این بافت تشخیص می دهند. متقاضیانی که می خواهند از پرتوانی رده های سلولی خود اطمینان حاصل کنند، می توانند جهت انجام این تست در بانک سلول های بنیادی رویان، هماهنگی های لازم را با مسئولین مربوطه به انجام برسانند.